一、什么是石蜡切片浴?
在石蜡切片机上切下来的组织切片(通常是几微米厚的连续蜡带)是皱缩的。“展片” 的目的是通过温和的加热和水的表面张力,将这些皱缩的蜡带重新展开,恢复其原始的平整形态,以便后续贴在载玻片上并进行染色。
这个过程的“浴”是指一个恒温的水槽。
二、展片水浴装置的核心组成部分
一个标准的展片水浴装置通常包括:
恒温水浴槽:一个不锈钢或玻璃材质的容器,用于盛放蒸馏水或去离子水。
加热器和温控系统:用于将水温维持在一个设定的温度(通常低于石蜡熔点10-15°C)。例如,如果石蜡的熔点是60°C,那么展片温度一般设置在42-48°C之间。
温度过低:蜡带无法充分展开,会产生褶皱。
温度过高:蜡带会过度软化、熔化甚至分散,导致组织形态破坏。
清洁系统(可选):一些高级型号带有过滤循环系统,以保持水面的清洁,防止杂质粘附到切片上。
三、标准操作步骤(SOP)
准备工作:
打开展片机电源,设定所需温度(例如45°C),等待水温升至设定值。
在水槽中注入干净的蒸馏水或去离子水至水位线(水面通常距顶端约1cm)。
准备好干净的载玻片(通常是经过防脱片剂处理的)、毛笔、镊子和滤纸。
放置切片:
用毛笔或镊子小心地将切好的蜡带从切片机上转移出来。
用毛笔轻轻托住蜡带,将其光亮、平整的一面朝下,轻轻漂浮在展片机的温水表面上。
关键:确保蜡带与水面接触,而不是“扔”进去,以免产生气泡在下面。
展片:
蜡带遇到温水后,会因受热和水的表面张力而在几秒钟内自动展开,皱褶消失。
如果仍有轻微皱褶,可以用镊子尖轻轻拨动蜡带的边缘辅助其展开。切忌用力过猛,以免撕破组织。
捞片:
取一张载玻片,以一定角度(约30-45°) 缓慢地插入水中,到达切片下方。
平稳地将载玻片向上抬起,让水面上的切片自然地、平整地贴附到载玻片的中间位置。
慢慢将载玻片完全移出水面,此时切片应已牢固贴在载玻片上,并带有一层薄薄的水膜。
沥干和烘干:
将贴好切片的载玻片直立放置在滤纸上或架子上,沥去多余水分。
随后将载玻片放入60°C左右的烘箱内烘烤30-60分钟。这一步至关重要,目的是彻底蒸发水分,使蜡片牢牢粘在载玻片上,防止在后续的脱蜡、水化及染色步骤中脱落。
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